ГОСТ 34535-2019 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания кокцидиостатиков с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

ГОСТ 34535-2019

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения содержания кокцидиостатиков с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Food products, feeds, food raw materials. Method for determination of coccidiostats by high performance liquid chromatography - mass spectrometry

МКС 65.120
67.050
67.100.10
67.120.10
67.120.20
67.120.30

Дата введения 2020-04-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")

2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июля 2019 г. N 120-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 августа 2019 г. N 528-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34535-2019 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 апреля 2020 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и продовольственное сырье - молоко, сухие молочные продукты, яйца, яичный порошок, яичный меланж, мясо и мясные продукты (все виды животных), мясо и субпродукты птицы, рыбу, а также комбикорма и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (ВЭЖХ-МС/МС) для определения содержания кокцидиостатиков.

Диапазон измерений - от 1,0 до 1000,0 мкг/кг.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.085 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности

ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ 4288 Изделия кулинарные и полуфабрикаты из рубленого мяса. Правила приемки и методы испытаний

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике*

________________

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.

ГОСТ 5848 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия

ГОСТ 6995 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 7269 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести

ГОСТ 9792 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 13496.0 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 22300 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия

ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809.1 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 29227 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29245-91 Консервы молочные. Методы определения физических и органолептических показателей

ГОСТ 31339 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 31467 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

ГОСТ 31654 Яйца куриные пищевые. Технические условия

ГОСТ 31720 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы отбора проб и органолептического анализа

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на стандарт дана недатированная ссылка, то следует использовать стандарт, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого стандарта. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Сущность метода

Метод основан на извлечении кокцидиостатиков из анализируемой пробы ацетонитрилом, очистке полученного экстракта методом твердофазной экстракции с последующим количественным определением их методом ВЭЖХ-МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций.

Количественное определение проводят методом внутреннего стандарта.

4 Условия выполнения измерений и требования безопасности

4.1 При определении содержания кокцидиостатиков должны быть соблюдены следующие условия:

4.2 Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го классов опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.3 Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.4 Приготовление градуировочных растворов проводят под тягой в вытяжном шкафу.

4.5 При проведении испытаний соблюдают правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением, по ГОСТ 12.2.085.

4.6 При выполнении измерений на хромато-масс-спектрометре следует соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019, пожаровзрывобезопасности по ГОСТ 12.1.018 и инструкции по эксплуатации прибора.

4.7 К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих высшее образование, прошедших соответствующий инструктаж, владеющих техникой хромато-масс-спектрометрии и изучивших инструкции по эксплуатации используемых приборов.

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, посуда и реактивы

5.1 Для определения содержания кокцидиостатиков применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и посуду:

- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1, с максимальной нагрузкой не более 150 г и пределами допускаемой абсолютной погрешности взвешивания не более ±0,001 г;

- весы высокого класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности взвешивания не более ±0,1 мг;

- масс-спектрометр диапазоном измерений от 50 до 1000 атомных единиц массы (а.е.м.), с массовым разрешением не менее 1000, точностью измерения массы не ниже 0,1 а.е.м., режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим МС/МС);

- систему высокоэффективной жидкостной хроматографии, оснащенную бинарным насосом со смесителем, термостатом хроматографической колонки, обеспечивающим температуру нагрева до (40±1)°С;

- колонку хроматографическую*, заполненную обращенно-фазовым сорбентом с частицами размером не более 5,0 мкм, длиной 150 мм и внутренним диаметром 2 мм;

________________

* Например, типов Agilent Pursuit XRs C18, Phenomenex Luna C18. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможности использования других колонок с аналогичными характеристиками.

- компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений;

- модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатирования 40°С;

- устройство вакуумное для твердофазной экстракции;

- картридж для твердофазной экстракции** вместимостью не менее 3 см, заполненный обращенно-фазовым сорбентом с частицами диаметром не более 50 мкм;

________________

** Например, моделей Waters Oasis HLB, Phenomenex Strata X. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможности использования других моделей с аналогичными характеристиками.

- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;

- мельницу лабораторную для измельчения кормов;

- встряхиватель (шейкер) вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой встряхивания не менее 3 мм и диапазоном скоростей от 150 до 2500 об/мин;

- центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения ротора не менее 15000 об./мин и диапазоном температур охлаждения от 4°С до 20°С, с адаптерами для пробирок вместимостью 15 см и микроцентрифужных пробирок вместимостью 1,5 см;

- баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 кГц и объемом не менее 1 дм;

- шкаф сушильный с максимальной температурой нагрева не менее 110°С и погрешностью поддержания заданной температуры ±5°С;

- систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением не более 18 Мом·см при температуре 20°С;*
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

- холодильник бытовой с рабочим диапазоном температур от 2°С до 8°С;

- камеру лабораторную морозильную с рабочим диапазоном температур от минус 15°С до минус 25°С;

- пробирки полипропиленовые вместимостью 15 см с навинчиваемыми пластмассовыми крышками;

- виалы (флаконы) стеклянные вместимостью 2 см с навинчиваемыми крышками и тефлоновыми прокладками диаметром 9 мм;

- пробы, не содержащие кокцидиостатики, подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8, в зависимости от типа анализируемой матрицы ("чистые" пробы***);

________________

*** Срок хранения "чистых" проб при температуре от минус 15°С до минус 25°С - не более 3 мес.

- пипетки одноканальные переменной вместимостью 20-100, 200-1000 мм, 1-5 см с допустимой относительной погрешностью дозирования не более ±2%;

- пробирки полипропиленовые микроцентрифужные вместимостью 1,5 см;

- фильтры мембранные с порами диаметром не более 0,2 мкм;

- колбы Кн-1-250(1000)-14/23 ТС по ГОСТ 25336;

- пипетки 2-2-1-10 по ГОСТ 29227;

- колбы 1-10(100)-2 по ГОСТ 1770;

- цилиндры 1-100(500, 1000)-1 по ГОСТ 1770.

5.2 При определении содержания кокцидиостатиков применяют следующие реактивы:

- ацетон по ГОСТ 2603;

- кислоту муравьиную по ГОСТ 5848, ч.д.а.;

- воду деионизированную для ВЭЖХ, полученную с использованием системы производства ультрачистой воды;

- метанол-яд по ГОСТ 6995, х.ч.;

- диметилсульфоксид (ДМСО) с массовой долей основного вещества не менее 99,0%;

- ацетонитрил для ВЭЖХ с массовой долей основного вещества не менее 99,9%;

- формиат аммония с массовой долей основного вещества не менее 99,0%;

- эфир этиловый уксусной кислоты (этилацетат) по ГОСТ 22300, х.ч.

5.3 При определении содержания кокцидиостатиков применяют:

5.3.1 Стандартные образцы кокцидиостатиков с массовой долей основного вещества не менее 90,0%:

- монензина натриевая соль;

- мадурамицина аммоний.

5.3.2 Стандартные образцы кокцидиостатиков с массовой долей основного вещества не менее 93,5%:

- наразин.

5.3.3 Стандартные образцы кокцидиостатиков с массовой долей основного вещества не менее 95,0%:

- лаидломицина пропионата калиевая соль;

- семдурамицина натриевая соль;

- декоквинат;

- толтразурил;

- тинидазол;

- динитрокарбанилид;

- диклазурил;

- толтразурила сульфон;

- галофугинона бромгидрат;

- этопабат;

- арприноцид;

- тернидазол;

- ронидазол;

- клопидол;

- ампролиума гидрохлорид;

- ласалоцида натриевая соль;

- робенидина гидрохлорид;

- салиномицина натриевая соль.

5.3.4 Внутренние стандарты кокцидиостатиков с массовой долей основного вещества не менее 95,0%:

- ронидазол-;

- динитрокарбанилид-;

- иономицина кальциевая соль;

- робенидин-;

- декоквинат-;

- этопабат-.

5.4 Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также вспомогательного оборудования, реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1 Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1 Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.

6.1.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (однократно), ацетоном (дважды).

6.1.3 Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105°С до 110°С.

6.1.4 Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

6.2 Приготовление растворов

6.2.1 Приготовление подвижных фаз А и Б

6.2.1.1 Для приготовления подвижной фазы А в коническую колбу вместимостью 1000 см приливают 475 см деионизированной воды, 250 см метанола и 275 см ацетонитрила, добавляют 0,5 г формиата аммония и 5,0 см муравьиной кислоты. Полученный раствор дегазируют на ультразвуковой бане в течение 5 мин.

Срок хранения при комнатной температуре - не более 1 мес.

6.2.1.2 Для приготовления подвижной фазы Б в коническую колбу вместимостью 1000 смприливают 475 см метанола и 525 см ацетонитрила, добавляют 0,5 г формиата аммония и 0,5 см муравьиной кислоты. Полученный раствор дегазируют на ультразвуковой бане в течение 5 мин.

Срок хранения при комнатной температуре - не более 1 мес.

6.2.2 Приготовление смеси метанола и ДМСО в объемном соотношении 1:1

В коническую колбу вместимостью 250 см мерным цилиндром отмеривают 50 см метанола и 50 см ДМСО, перемешивают.

Срок хранения при комнатной температуре - не более 1 мес.

6.3 Приготовление градуировочных растворов

6.3.1 Приготовление исходных растворов стандартов кокцидиостатиков массовыми концентрациями 100 мкг/см

Для приготовления исходных стандартных растворов рассчитывают массы стандартных образцов (мг), эквивалентные 10,0 мг соответствующих аналитов, по формуле

, (1)

где - массовая доля основного вещества в i-м стандартном образце, %

- молярная масса основного вещества в i-м стандартном образце, г/моль;

- молярная масса i-го аналита, г/моль.

Взвешивание стандартных образцов с рассчитанными массами проводят с точностью до первого десятичного знака.

Для приготовления индивидуальных стандартных растворов наразина, лаидломицина, декоквината, тинидазола, этопабата, тернидазола, ронидазола, ласалоцида, мадурамицина, робенидина, салиномицина в отдельные мерные колбы вместимостью 100 см каждая вносят рассчитанные массы соответствующих стандартных образцов, приливают по 80 см метанола, перемешивают.

Для приготовления индивидуальных стандартных растворов семдурамицина, толтразурила, диклазурила, толтразурила, галофугинона, арприноцида, клопидола, ампролиума, динитрокарбанилида, монензина в отдельные мерные колбы вместимостью 100 см каждая вносят рассчитанные массы соответствующих стандартных образцов, приливают по 80 см смеси метанола и ДМСО (6.2.2), перемешивают.

Колбы помещают в ультразвуковую баню на 1 мин, после чего доводят объемы растворов соответствующим растворителем до 100 см по меткам на колбах.

Срок хранения растворов при температуре от минус 15°С до минус 25°С - не более 2 лет.