ГОСТ 34533-2019 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

ГОСТ 34533-2019

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Метод определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Food products, food raw materials. Method for determination of sulfonamides, nitroimidazoles, penicillins, amphenicols by high performance liquid chromatography-mass spectrometry

МКС 67.050
67.100.10
67.120.10
67.120.20
67.120.30
67.180.10

Дата введения 2020-04-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")

2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 июня 2019 г. N 55)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Россия	RU	Росстандарт
Таджикистан	TJ	Таджикстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт
Украина	UA	Минэкономразвития Украины

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 14 августа 2019 г. N 498-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34533-2019 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 апреля 2020 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и продовольственное сырье - молоко, молочные продукты, яйца, яичный порошок, яичный меланж, мясо и мясные продукты (все виды животных), мясо и продукты из мяса птицы, мед, рыбу, морепродукты и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (ВЭЖХ-МС/МС) для определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов.

Диапазон измерений для хлорамфеникола - от 0,2 до 1000 мкг/кг, для остальных соединений - от 1,0 до 1000,0 мкг/кг.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.085 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности

ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике*
_______________
* В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.

ГОСТ 6995 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 7269 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести

ГОСТ 9147 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 19792-2017 Мед натуральный. Технические условия

ГОСТ 26809.1 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 26809.2 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 2. Масло из коровьего молока, спреды, сыры и сырные продукты, плавленые сыры и плавленые сырные продукты

ГОСТ 29227 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29245-91 Консервы молочные. Методы определения физических и органолептических показателей

ГОСТ 31339 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 31467 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

ГОСТ 31654 Яйца куриные пищевые. Технические условия

ГОСТ 31720 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы отбора проб и органолептического анализа

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на стандарт дана недатированная ссылка, то следует использовать стандарт, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого стандарта. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Сущность метода

Метод основан на извлечении сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов из анализируемой пробы ацетонитрилом с последующим количественным определением их методом ВЭЖХ-МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций.

Количественное определение проводят методом внутреннего стандарта.

4 Условия выполнения измерений и требования безопасности

4.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- температура окружающего воздуха	от 15°С до 25°С;
- относительная влажность воздуха	от 20% до 80%.

4.2 Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го классов опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.3 Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.4 Приготовление градуировочных растворов проводят под тягой в вытяжном шкафу.

4.5 При проведении испытаний соблюдают правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением, по ГОСТ 12.2.085.

4.6 При выполнении измерений на хромато-масс-спектрометре следует соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкции по эксплуатации прибора.

4.7 К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих высшее специальное образование, прошедших соответствующий инструктаж, владеющих техникой хромато-масс-спектрометрии и изучивших инструкции по эксплуатации используемых приборов.

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, посуда и реактивы

5.1 Для определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и посуду:

- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1, с максимальной нагрузкой не более 150 г и пределами допускаемой абсолютной погрешности взвешивания не более ±0,001 г;

- весы высокого класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности взвешивания не более ±0,1 мг;
________________
Письмом Росстандарта от 24.04.2020 г. N 1095-ОГ/03 разъясняется, что "В третьем абзаце п.5.1 ГОСТ 34533-2019 допущена опечатка". Следует читать: весы I класса точности с действительной ценой деления шкалы не более 0,1 мг. - Примечание изготовителя базы данных.

- масс-спектрометр диапазоном измерений от 50 до 500 атомных единиц массы (а.е.м.), с массовым разрешением не менее 500, точностью измерения массы не ниже 0,1 а.е.м., режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим МС/МС);

- систему высокоэффективной жидкостной хроматографии, оснащенную бинарным насосом со смесителем, термостатом хроматографической колонки, обеспечивающим температуру нагрева до (40±1)°С;

- колонку хроматографическую*, заполненную обращенно-фазовым сорбентом с частицами размером не более 5 мкм, длиной 150 мм;
_______________
* Например, типов Agilent Pursuit XRs С18, Phenomenex Luna C18. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования других колонок с аналогичными характеристиками.

- компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений;

- устройство вакуумное для твердофазной экстракции;

- картриджи для твердофазной экстракции** вместимостью не менее 3 см, заполненные обращенно-фазовым сорбентом с частицами диаметром не более 50 мкм;
_______________
** Например, моделей Waters Oasis HLB, Phenomenex Strata X. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования других моделей с аналогичными характеристиками.

- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;

- встряхиватель (шейкер) вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой встряхивания не менее 3 мм и диапазоном скоростей от 150 до 2500 об/мин;

- центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения ротора не менее 4000 об/мин и диапазоном температур охлаждения от 4°С до 20°С, с адаптером для пробирок вместимостью 15 см;

- баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 кГц и объемом не менее 1 дм;

- шкаф сушильный с максимальной температурой нагрева не менее 110°С и погрешностью поддержания заданной температуры ±5°С;

- систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением не более 18,2 МОм·см при температуре 20°С;

- камеру лабораторную морозильную с рабочим диапазоном температур от минус 15°С до минус 25°С;

- холодильник бытовой с рабочим диапазоном температур от 2°С до 8°С;

- пробирки полипропиленовые вместимостью 15 см с навинчиваемыми пластмассовыми крышками;

- виалы (флаконы) стеклянные вместимостью 2 см с навинчиваемыми крышками и тефлоновыми прокладками диаметром 9 мм;

- фильтры мембранные с порами диаметром не более 0,2 мкм;

- пробы, не содержащие сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов, подготовленные и проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8, в зависимости от типа исследуемой матрицы ("чистые" пробы***);
_______________
*** Срок хранения "чистых" проб при температуре от минус 15°С до минус 25°С - не более 3 мес.

- пипетки одноканальные переменной вместимостью 10-100, 200-1000 мм, 1-5 см с допустимой относительной погрешностью дозирования не более ±2%;

- колбы 2-10(100, 1000)-2 по ГОСТ 1770;

- пипетки 2-2-1-10 по ГОСТ 29227;

- цилиндр 1-500-1 по ГОСТ 1770;

- ступку 3, пестик 2 по ГОСТ 9147.

5.2 При определении остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов применяют следующие реактивы:

- ацетон по ГОСТ 2603;

- метанол-яд по ГОСТ 6995, х.ч.;

- ацетонитрил для ВЭЖХ с массовой долей основного вещества не менее 99,9%;

- воду деионизированную для ВЭЖХ, полученную с использованием системы производства ультрачистой воды.

5.3 При определении остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов применяют:

5.3.1 Стандартные образцы сульфаниламидов с массовой долей основного вещества не менее 95,0%:

- сульфахлорпиридазин;

- сульфатиазол;

- сульфадиметоксин;

- сульфахиноксалина натриевая соль;

- сульфапиридин;

- сульфаметазин;

- сульфамеразин;

- сульфадиазина натриевая соль;

- триметоприм;

- сульфамоксол;

- сульфаэтоксипиридазин;

- сульфаметоксазол;

- сульфагуанидин моногидрат;

- сульфаметоксипиридазин;

- сульфаниламид.

5.3.2 Стандартные образцы нитроимидазолов с массовой долей основного вещества не менее 95,0%:

- ронидазол;

- диметридазол;

- метронидазол;

- гидроксиметронидазол;

- ипронидазол;

- гидроксиипронидазол;

- гидроксиметилметилнитроимидазол;

- тинидазол;

- тернидазол.

5.3.3 Стандартные образцы пенициллинов с массовой долей основного вещества не менее 95,0%:

- оксациллин;

- амоксициллина тригидрат;

- клоксациллина натриевая соль;

- диклоксациллина натриевая соль;

- ампициллина тригидрат;

- бензилпенициллин;

- феноксиметилпенициллин;

- нафциллина натриевая соль.

5.3.4 Стандартные образцы амфениколов с массовой долей основного вещества не менее 95,0%:

- хлорамфеникол;

- флорфеникол амин;

- флорфеникол;

- тиамфеникол.

5.3.5 Внутренние стандарты сульфаниламидов с массовой долей основного вещества не менее 95,0%:

- сульфатиазол-;

- сульфадиметоксин-;

- сульфаметазин-;

- сульфадиазин-;

- триметоприм-;

- сульфаметоксазол-.

5.3.6 Внутренние стандарты нитроимидазолов с массовой долей основного вещества не менее 95,0%:

- ронидазол-;

- диметридазол-;

- метронидазол-;

- гидроксиметилметилнитроимидазол-;

- ипронидазол-;

- гидроксиипронидазол-.

5.3.7 Внутренний стандарт пенициллинов:

- бензилпенициллин- с массовой долей основного вещества не менее 95,0%.

5.3.8 Внутренний стандарт амфениколов:

- хлорамфеникол- с массовой долей основного вещества не менее 95,0%.

5.4 Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также оборудования, реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1 Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1 Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.

6.1.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей промывкой органическим растворителем - ацетоном (дважды).

6.1.3 Процедуру промывки ацетоном следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105°С до 110°С.

6.1.4 Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

6.2 Приготовление растворов

6.2.1 Приготовление смеси метанола и деионизированной воды в объемном соотношении 1:1

В мерной колбе вместимостью 1000 см смешивают 500 см деионизированной воды и 500 см метанола. Колбу помещают в ультразвуковую баню на 5 мин.

Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 8°С - не более 3 мес.

6.2.2 Приготовление градуировочных растворов

6.2.2.1 Приготовление исходных растворов стандартов анализируемых соединений массовыми концентрациями 1000 мкг/см

Для приготовления исходных стандартных растворов рассчитывают массы стандартных образцов (мг), эквивалентные 10,0 мг соответствующих аналитов, по формуле

, (1)

где - массовая доля основного вещества в i-м стандартном образце, %;

- молярная масса основного вещества в i-м стандартном образце, г/моль;

- молярная масса i-го аналита, г/моль.

Примечание - Значения и применяют при расчете навесок веществ в виде солей, гидратов (сульфахиноксалина натриевая соль, сульфадиазина натриевая соль, сульфагуанидин моногидрат, амоксициллина тригидрат, клоксациллина натриевая соль, диклоксациллина натриевая соль, ампициллина тригидрат, нафциллина натриевая соль).

Взвешивание стандартных образцов с рассчитанными массами проводят с точностью до первого десятичного знака. Для приготовления индивидуальных стандартных растворов в отдельные мерные колбы вместимостью 10 см каждая вносят рассчитанные массы соответствующих стандартных образцов, приливают по 8 см метанола [для пенициллинов - по 8 см смеси метанола и деионизированной воды (6.2.1)], перемешивают и помещают колбы в ультразвуковую баню на 1 мин, после чего доводят объемы растворов до 10 см соответствующим растворителем по меткам на колбах.

Срок хранения при температуре от минус 15°С до минус 25°С растворов пенициллинов - не более 4 мес, остальных растворов - не более 1 года.

Перед применением растворы выдерживают в термостате при температуре 20°С не менее 30 мин.

6.2.2.2 Приготовление рабочих стандартных растворов

Рабочий стандартный раствор готовят в мерной колбе вместимостью 100 см. Рабочие стандартные растворы готовят в мерных колбах вместимостью 10 см в соответствии с рисунком 1.

Рисунок 1 - Приготовление рабочих растворов

Растворы хранят при температуре от минус 15°С до минус 25°С не более 3 мес. Растворы используют свежеприготовленными.

Перед применением растворы выдерживают в термостате при температуре 20°С не менее 30 мин.

Допускается приготовление рабочих стандартных растворов иных концентраций в заданном диапазоне измерений.

6.2.2.3 Приготовление исходных растворов внутренних стандартов анализируемых соединений массовыми концентрациями 1000 мкг/см

Для приготовления исходных растворов внутренних стандартов рассчитывают массы внутренних стандартов (мг), эквивалентные 10,0 мг соответствующих аналитов, по формуле (1).

Взвешивание образцов внутренних стандартов с рассчитанными массами проводят с точностью до первого десятичного знака. Для приготовления индивидуальных растворов внутренних стандартов в отдельные мерные колбы вместимостью 10 м каждая вносят рассчитанные массы соответствующих внутренних стандартов, приливают по 8 см метанола [(для пенициллинов - по 8 см смеси метанола и деионизированной воды (6.2.1)], перемешивают и помещают колбы в ультразвуковую баню на 1 мин, после чего доводят объемы растворов до 10 см соответствующим растворителем по меткам на колбах.

Срок хранения при температуре от минус 15°С до минус 25°С растворов пенициллинов - не более 4 мес, остальных растворов - не более 1 года.

Перед применением растворы выдерживают в термостате при температуре 20°С не менее 30 мин.

Внутренние стандарты для сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов выбирают в соответствии с таблицей 1.