Мастер-микс для ПЦР с высокоточной ДНК-полимеразой с «горячим» стартом Phusion Green Hot Start II

ДНК-полимераза Phusion является золотым стандартом для высокпроизводительной ПЦР. Частота ошибок у этой полимеразы более чем в 50 раз ниже, чем у стандартной Taq ДНК-полимеразы, и в 6 раз ниже, чем у Pfu. ДНК-полимераза Phusion – наилучший выбор для клонирования и других экспериментов, требующих высокой точности при синтезе ДНК. Этот фермент обеспечивает стабильный выход ПЦР-продукта и быстроту проведения амплификации даже в присутствии ингибиторов.

Использование для ПЦР ДНК-полимеразы с горячим стартом Phusion Hot Start II исключает возможность синтеза неспецифических продуктов в процессе подготовки ПЦР-смесей. Это происходит благодаря комбинации фермента со специфическим лигандом Affibody, ингибирующим активность полимеразы при комнатной температуре. Этот лиганд также ингибирует 3’→5’ экзонуклеазную активность, предотвращая деградацию праймеров и матрицы. При нагревании реакционной смеси до определённой температуры в ходе ПЦР лиганд быстро отщепляется от полимеразы, поэтому в протоколе реакции не требуется специальная стадия активации фермента.

ДНК-полимераза Phusion Hot Start II синтезирует ПЦР-продукты с тупыми концами.

Мастер-микс для ПЦР Phusion Green Hot Start II – это 2-кратная готовая реакционная смесь для ПЦР, содержащая ДНК-полимеразу Phusion Hot Start, дезоксинуклеотидтрифосфаты (400 мкМ каждого) и оптимизированный буфер GC с MgCl₂ (1,5 мМ в конечной концентрации). Кроме того, в состав мастер-микса входят утяжеляющий агент и два маркерных красителя, что позволяет наносить ПЦР-продукты на гель непосредственно после амплификации, без добавления реагентов для электрофореза. Мастер-микс – это удобный формат для постановки ПЦР, позволяющий экономить время и снизить число пипетирований, уменьшая тем самым риск ошибки.

Кроме пробирки с мастер-миксом Phusion Green Hot Start II, в набор входят отдельные пробирки с ДМСО и водой, не содержащей нуклеаз.

Условия хранения - 20 °С.

Особенности мастер-миксов Phusion Green Hot Start II:

• высокая точность синтеза (в 52 раза выше по сравнению с Taq);
• возможность подготовки реакционных смесей при комнатной температуре;
• отсутствие неспецифического синтеза и деградации праймеров в процессе подготовки ПЦР;
• быстрая ре-активация полимеразы при запуске ПЦР;
• более высокая скорость синтеза – 1 тыс. п.н. за 15-30 секунд;
• универсальность – практически не требуется оптимизация условий ПЦР;
• больший выход ПЦР-продукта при минимальном количестве фермента;
• возможность нанесения ПЦР-продуктов на гель без добавления специальных реагентов для электрофореза.

Области применения:

• высокоточная ПЦР;
• клонирование;
• синтез ДНК для секвенирования;
• амплификация сложных (GC-богатых) последовательностей;
• ПЦР длинных фрагментов (до 20 тыс. п.н.);
• сайт-специфический мутагенез;
• высокопроизводительная ПЦР;
• мультиплексная ПЦР;
• получение микрочипов.